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ELISA試劑盒質(zhì)量控制血清

2016-01-11 [1328]

 

質(zhì)量控制血清

質(zhì)控血清是已有靶值的血清,在每次的常規(guī)檢驗中加入一份或數(shù)份,通過所得結(jié)果來了解本次檢驗的情況。質(zhì)控血清檢驗的結(jié)果如能控制其誤差在一定范圍內(nèi),ELISA試劑盒就說明該檢驗沒有發(fā)生不允許的誤差。如果出現(xiàn)超過允許誤差范圍的異常結(jié)果,提示該檢驗不合格,應尋找原因,糾正后,重檢待測標本。因此質(zhì)控血清在質(zhì)控工作中起重要作用。

1.質(zhì)控血清的使用

衛(wèi)生部臨床檢驗中心制備的乙肝標志物質(zhì)控血清,可以在-20保持半年定值不變。冰凍狀態(tài)融化使用時,應先混勻,未用完部分可在4保存5天。不宜反復冰融或自行分裝。開展某項檢驗的室內(nèi)質(zhì)控工作需要的質(zhì)控血清,一般按3-6個月用量準備。自制的不定值質(zhì)控血清,在一批質(zhì)控血清將用完之前,需準備下一批質(zhì)控血清。質(zhì)控血清要求性能穩(wěn)定,較長期內(nèi)效價不變,其理化性質(zhì)應與病人樣本相近,這樣才能有效地起到監(jiān)測作用。

2.臨界值質(zhì)控血清

質(zhì)控制血清分定值和未定值兩種。如只用一份質(zhì)控血清定值,一般定在正常值與異常值交界點上,定性測定時處于弱陽性水平,稱為臨界值。乙肝標志物臨界值的制定,ELISA試劑盒應按臨床要求,為臨床提供統(tǒng)一的判斷弱陽性的標準。 臨界值質(zhì)控血清可以作為試劑盒中的陽性對照品和陰性對照品以外的第三個對照品,它可以靈敏地反映出試劑盒的檢出水平,確保弱陽性反應的標本不漏檢。

3.質(zhì)控血清的制備

每個實驗室可以根據(jù)自己的條件,選用臨床中心提供的質(zhì)控血清,或按以下方法自己制備本室使用的質(zhì)控血清(以乙肝質(zhì)控血清為例)。

1)收集新鮮的無溶血、無黃疸、無細菌污染的陽性血清。

256加熱10小時來活。

3)離心或過濾除去沉淀。

4)用10%的小牛血清或正常人血清(PBS緩沖液)將收集的血清稀釋至所需的濃度。如能用正常的人血清稀釋更好,因其成份更接近于檢測標本。

5)抽濾除菌。按一次使用的量分裝小安瓿,封口,20保存?zhèn)溆?。不可反復凍融。被檢物要求檢出的水平常被認為是質(zhì)控血清應選擇的水平。如果該試驗還有其它要求,則應加所要求濃度的質(zhì)控物。

6)標定含量。20-30次測定結(jié)果刪除>±2SD數(shù)據(jù)的均值作為靶值,ELISA試劑盒并與已知定值血清對比測定。

二、室內(nèi)質(zhì)量控制程序

臨床檢驗的檢測結(jié)果,每次或每天之間不可能*。決定允許的誤差范圍,以臨床上不造成誤診與漏診為準,通過以下步驟來確定質(zhì)控范圍。

1.合適條件下的測定誤差

合適條件下已知值質(zhì)控血清變異(optimal conditions variance,簡稱OCV)的測定:在本實驗室合適條件下(包括操作者、試劑、儀器等)檢測質(zhì)控血清20-30次,測得結(jié)果計算,求出該組數(shù)據(jù)的均值和標準差(SD)表示該實驗室的合適工作質(zhì)量。

現(xiàn)舉例說明HBsAg ELISA法檢測時OCV的測定。使用的質(zhì)控制血清為臨界血清,HBsAg濃度為5ng/ml。在該實驗室中選擇素質(zhì)、操作zui熟練的技術(shù)員進行認真地專門測定,選用合適的試劑盒,檢測之前,將恒箱、加樣器等認真校正、調(diào)校正、調(diào)試,使用新的加樣吸頭等,即在合適、的條件下進行檢測。除質(zhì)控血清外同時測定陰性對照品和陽性對照品。并作雙份測定,得出2個吸光值(A值),求出X。連續(xù)作20次,求出20X,即X1……X20。從這20個數(shù)據(jù)中,求出OCVXSD

2.已知值的血清在常規(guī)檢驗條件下的誤差

常規(guī)條件下已知值質(zhì)控血清變異(routine conditions variance-known value,簡稱RCVK)的測定:做常規(guī)檢驗的技術(shù)人員,在常規(guī)檢驗的條件下,將質(zhì)控血清放在常規(guī)檢測樣本中,進行20次檢驗,結(jié)果計算同OCV法。一般認為RCVSDOCVSD兩倍范圍內(nèi)可以接受。若太大應該查找原因,使其向OCVSD值靠近。在改進實驗室條件后(例如較正加樣器,糾正洗板操作,調(diào)正溫育溫度等),重新進行RCVK的測定。如果RCVKSD值更小,說明OCV不是合適條件下測定的,應重新再測OCV。常規(guī)條件下,RCVK肯定要比OCV大。通過質(zhì)控控制各項條件,使RCVK的數(shù)據(jù)盡可能接近OCV值。RCVK的數(shù)據(jù)反映該實驗室日常工作的質(zhì)量,用于作質(zhì)控圖,對室內(nèi)檢驗的結(jié)果進行控制,每日檢驗的結(jié)果,報告能否發(fā)出。

 

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