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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中遇到的問(wèn)題

2014-03-13 [1170]

大家在做ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中,難免會(huì)遇到各種不同的問(wèn)題,比如標(biāo)準(zhǔn)曲線不好,試劑盒的回收率,假陰性,假陽(yáng)性,實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性不好等等?,F(xiàn)在上海勁馬生物科技有限公司就來(lái)一一解答用戶們?cè)趯?shí)驗(yàn)過(guò)程中遇到的各種疑問(wèn)!
曲線問(wèn)題: 
1.OD值不正常
試劑盒未回溫,試劑盒回溫到25℃
溫度控制不好,控制正確溫度
孵育時(shí)間不準(zhǔn)確,控制孵育時(shí)間
洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、洗滌次數(shù)增 加,洗滌4-5次,每孔250ul,然后拍干
陽(yáng)光直射,對(duì)著風(fēng)直接吹,避風(fēng)避
酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)錯(cuò)誤,酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)450nm
抗體的稀釋錯(cuò)誤,正確的稀釋抗體
水質(zhì)問(wèn)題,用娃哈哈礦泉水代替
2.白   板
洗滌液配制錯(cuò)誤,正確的配制洗滌液
少加液體(錯(cuò)加液體),正確的步驟加液體
3.無(wú) 梯 度
標(biāo)準(zhǔn)品也污染,換標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)板
OD值不正常,控制溫度時(shí)間在做一次
人為點(diǎn)板,不要點(diǎn)板
4.線 性 不 好
OD值不正常,控制溫度時(shí)間在做一次
回收率
1.空白管陽(yáng)性高
樣本本身就是陽(yáng)性樣本,換陰性樣本做回收率
空白管在實(shí)驗(yàn)中被污染,實(shí)驗(yàn)中防止交叉污染
水質(zhì)原因用,娃哈哈礦泉水代替
2.偏  高
添加量不準(zhǔn)確,的添加量
添加濃度不適合,添加合適的濃度
取液吹干量多,準(zhǔn)確的取液吹干
取到其它相層液體,取需用相吹干
復(fù)溶液未稀釋或加入量少,正確的稀釋復(fù)溶液
3.偏  低
添加量不準(zhǔn)確,的添加量
添加濃度不適合,添加合適的濃度
取液吹干量少,準(zhǔn)確的取液吹干
復(fù)溶液稀釋錯(cuò)誤或加入量多,正確的稀釋復(fù)溶液
假陰、陽(yáng)性
1,水質(zhì)原因:點(diǎn)復(fù)溶液驗(yàn)證,用娃哈哈礦泉水代替
2,實(shí)驗(yàn)操作原因
吸取到其它相吹干,準(zhǔn)確的取液吹干
離心不*,延長(zhǎng)離心時(shí)間
樣本的污染,更換樣本
乳化未處理*,溫浴(70℃)處理乳化現(xiàn)象
3,儀器試劑原因
離心管未清洗干凈,正確的洗滌器具
有機(jī)溶劑的影響,做試劑空白看影響結(jié)果
4,衍生化試劑原因(長(zhǎng)時(shí)間衍生化試劑變質(zhì)),更換衍生化試劑
5,與曲線好壞相關(guān),,保證曲線的正常

 

      
 

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