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ELISA試劑盒競爭抑制法操作問題

2014-01-25 [2139]

ELISA試劑盒方法做兩對半,其中HBsAg、HBsAb、HBeAg使用雙抗原/抗體夾心法檢測,而HBcAb、HBeAb使用競爭抑制法檢測。而競爭抑制法的原理:酶標抗體與樣本抗體在同樣的體系中,與固相抗原競爭結(jié)合是等比關(guān)系。理論上講,應(yīng)該先將樣本與酶標抗體先行混勻,然后加入反應(yīng)也進行。但實際工作中并非如此,都是分開加入反應(yīng)孔。這樣會造成先加入的先結(jié)合,與后加入者并不是公平的關(guān)系,因而也不符合等比原則。特別是在放置時間長,且溫度高的情況下,對結(jié)果有很大的影響。

第二軍醫(yī)大學長海醫(yī)院對此造成的影響進行了研究。將94份陰性標本用生理鹽水進行1:30稀釋,在加入標本后按下表時間放置后將陰性標本94份并用生理鹽水進行1:30稀釋,在加入標本后按下表時間放置后再加入酶標抗體,然后檢測結(jié)果如下: 

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    從上表可以看出,如果同時加入標本與酶標抗體,沒出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象。2分鐘后再加入酶標抗體,由于標本比酶標抗體先結(jié) 合了兩分鐘,因此出現(xiàn)了7.4%的假陽性。30分鐘后再加,假陽性高達57.4%。因此建議競爭抑制法的項目,加十個樣本后立即加酶標抗體,這樣對檢測結(jié)果沒有影響。

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