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上海研域生物講解ELISA試劑盒構(gòu)成及檢測原理

2023-12-13 [1223]

以雙抗體夾心法為例,上海研域生物對ELISA試劑盒簡要操作步驟如下:

ELISA試劑盒

  包被抗體包被到酶標板

  加樣本/標準品

  加生物s標記的檢測抗體

  加HRP標記的鏈霉親和素

  加顯色底物TMB

  加終止液

  ELISA 試劑盒組分

  酶標板(Microplate)

  酶標板,在ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)中作為載體的酶標板對抗原抗體或抗原抗體復(fù)合物的吸附起著重要作用。

  標準品(Standard)

  標準品即為已知濃度的目標物(樣本中待測因子)的純蛋白,對標準品進行梯度稀釋,用于制作標準曲線。

  生物s標記的檢測抗體(Detected Antibody)

  檢測抗體即為與目標物特異性結(jié)合的抗原/抗體鑒于酶標二抗的局限性,現(xiàn)在廠家一般引入生物s親和素系統(tǒng)(biotin avidin system,BAS)。

  洗滌液(Washing Buffer)

  長時間的孵育后,會出現(xiàn)非特異性結(jié)合,這時就需要洗滌液來洗去非特異性結(jié)合的蛋白或抗體。常用的洗滌液有:磷酸鹽緩沖液(PBS)、平衡鹽緩沖液(BBS)等。

  辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素(HRP-Streptavidin)

  鏈霉親和素是Streptomyces avidinii(阿維丁鏈霉菌)的分泌物。鏈霉親和素分子由4條相同的膚鏈組成,非特異性結(jié)合遠比親和素低。在ELISA試劑盒中,用于與檢測抗體上的生物s相結(jié)合。

  TMB在過氧化氫存在的情況下可被HRP或其他過氧化物酶催化生成可溶的藍色物一價物。當(dāng)顯色反應(yīng)被酸性溶液終止后,產(chǎn)物由藍色一價物轉(zhuǎn)為黃色二價物,此時可在450nm 測定吸光度

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