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認(rèn)識(shí)白介素試劑盒,從這篇文章開始!

2021-08-16 [1532]
  白介素試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被白介素捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。顏色的深淺和樣品中的白介素呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。
 
  從六個(gè)方面認(rèn)識(shí)白介素試劑盒
 
  1.靈敏度:為試劑檢出被檢物質(zhì)的低量的能力和試劑對(duì)大量樣品中陽性檢出的能力。
 
  2.特異性:常用交叉反應(yīng)率表示。含有與待測(cè)物相近結(jié)構(gòu)部分的物質(zhì)可能存在交叉反應(yīng),使測(cè)定結(jié)果升高,可能導(dǎo)致假陽性,所以交叉反應(yīng)是評(píng)價(jià)其質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。
 
  3.精密度:一般指其批內(nèi)CV%,其值應(yīng)小于15%;定量試劑應(yīng)同時(shí)考察線性范圍。
 
  4.準(zhǔn)確度:通過添加回收實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
 
  5.安全性:指試劑對(duì)操作者和環(huán)境安全無害無傳染性。
 
  6.經(jīng)濟(jì)性:試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本,而市場(chǎng)價(jià)格比較合理。
 
  白介素試劑盒操作步驟:
 
  1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
 
  2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
 
  3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
 
  4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
 
  5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
 
  6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
 
  7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
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