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ELISA試劑盒的組成和操作步驟

2018-03-08 [2427]

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ELISA試劑盒操作過程:
1. 加規(guī)范品:在酶標包被板上設規(guī)范品孔,依次參加不同濃度的規(guī)范品50ul(主張每個濃度做2個平行孔)
2. 加樣:別離設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其他各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品40μl,
然后再加樣品親和素10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,悄悄晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗刷液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5. 洗刷:當心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗刷液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:除空白孔外每孔參加酶標試劑50μl。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗刷:操作同5。
9. 顯色:每孔先參加顯色劑A50μl,再參加顯色劑B50μl,悄悄震動混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 停止:每孔加停止液50μl,停止反響(此時藍色立轉(zhuǎn))。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加停止液后15分鐘以內(nèi)進行。
完整的ELISA試劑盒包括以下各組分:
(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)
(2)酶符號的抗原或抗體(結(jié)合物);
(3)酶的底物;
(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參閱規(guī)范品和控制血清(定量測定中);
(5)結(jié)合物及標本的稀釋液;
(6)洗刷液
(7)酶反響停止液。
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